小林昭二出道于俳优座剧团，为俳优座养成所第2期小林昭二
生，先后效力于新协剧团、新人会剧团、日活株式会社、舞プロモーション等剧团及事务所。1952年（昭和27年）出演的《杀人容疑者》是其第一部作品，并于1960年自立俳优小剧场。
1996年8月27日因肺癌逝世于神奈川县横滨市青叶区藤が丘的昭和大学附属藤が丘医院，享年65岁。
于1997年上映的特摄电影《哉阿斯奥特曼2 超人大战光与影》中，其遗照由同样出演过初代奥特曼的二瓶正也手持出场，而他本人的遗作影像亦有出现。
继任者
小林昭二逝世后，其出演过的影视系列作品中相关角色继任者如下：
宫内洋：《假面骑士 THE FIRST》——立花藤兵卫。